| 背景资料 |
使用方法：
1．胶染法（用法同EB）（推荐方法）
（1） 制胶时加入RealRed 核酸染料（例如：每50ml 琼脂糖溶液中加入5μl RealRed 10,000× 储液，以此比例类推）。
（2） 按照常规方法进行电泳。
注意事项：
?此方法染色染料用量相对较少。500μl染料大约可以做100块 50ml的胶。
?由于RealRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将RealRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。RealRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
?如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。
此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
2．泡染法
（1） 按照常规方法进行电泳。
（2） 用H2O将Real Red 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如将15μl Real Red 10,000× 储液和5ml 1M NaCl加到45ml H2O中）。
（3） 将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。
注意事项：
?用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
3× RealRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。 |